Test ELISA zazna številne bolezni, zato je našel široko uporabo v medicini in še več. Vendar pa je test ELISA najbolj znan po diagnozi lymske borelioze. Kaj je test ELISA? Kako razlagati rezultate? Kakšna je cena testa?
Kazalo:
- Test ELISA - kaj zazna? Uporaba testa ELISA
- Test ELISA - kaj je test?
- Test ELISA in borelioza - kdaj opraviti?
- ELISA test - cena. Koliko stane test ELISA?
- Test ELISA - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?
- Test ELISA - rezultati. Ali so lahko lažno negativni?
Test ELISA, tj. Encimski imunski test, je pogosto uporabljena laboratorijska metoda, ki med drugim služi za kvantitativno odkrivanje protiteles v krvi.
Iz tega razloga je test ELISA našel uporabo pri diagnozi bakterijskih bolezni, kot je lajmska borelioza.
Prednost metode ELISA je enostavnost in možnost hitre izvedbe ter visoka občutljivost. Metoda ELISA se izvaja na posebnih plastičnih ploščah z vdolbinicami, napolnjenimi z npr. Proteini Borrelia (antigeni) in specifičnimi monoklonskimi protitelesi, ki so namenjena zaznavanju protiteles v vzorcu pacienta.
Test ELISA - kaj zazna? Uporaba testa ELISA
Zaradi visoke občutljivosti in enostavnosti metode ELISA je bila uporabna pri diagnozi številnih bolezni, najbolj znana pa je kot diagnostična metoda lymske borelioze.
V primeru diagnoze lymske borelioze se imenuje t.i. posredni ELISA, ki omogoča zaznavanje specifičnih IgM ali IgG v testiranem materialu. Na enak način lahko za diagnozo odkrijemo protitelesa:
- virusne okužbe: virusi herpesa (herpes, herpes zoster, Epstein-Barr, citomegalovirus), HIV, virusi hepatitisa (HBV in HCV)
- protozojske okužbe: toksoplazmoza, giardioza
- avtoimunske bolezni: celiakija (protitelesa proti tTG ali anti-DPG), Hashimotova bolezen (protitelesa proti TG in anti-TPO), vnetne črevesne bolezni (protitelesa proti ASCA in anti-ANCA)
- parazitske bolezni in alergije, pri katerih se odkrijejo specifična protitelesa IgE. Njihova povečana raven lahko kaže na prisotnost alergij na primer na cvetni prah in hrano ali parazitske invazije (oborožena trakulja, človeška okrogla glista)
Obstajajo tudi spremembe metode ELISA (tako imenovani sendvič ELISA), ki omogočajo odkrivanje vzorca beljakovin, ki niso protitelesa. Nato je cilj testa v biološkem materialu odkriti:
- drobci virusov ali bakterij, najpogosteje so to antigeni, značilni za dani patogen
- serumski hormoni, npr. estrogen, prolaktin, TSH, fT4, kortizol
- encimi, npr. kalprotektin, elastaza trebušne slinavke, alkalna fosfataza
- tumorski markerji, npr. CA-125
- prisotnost zdravil v serumu
Ta metoda je uporabna tudi v živilski industriji, kjer lahko v hrani zazna sledi alergenov (npr. Mleko, arašidi), GSO ali toksinov.
Test ELISA - za kaj gre?
Diagnoza na primer lymske borelioze z uporabo metode ELISA zajema odkrivanje imunskih proteinov v biološkem materialu - protiteles, ki se pojavijo med odzivom na antigene borelije.
Protitelesa testiramo v dveh razredih, IgM in IgG. IgM so prva protitelesa, ki se pojavijo v telesu, ko pridejo v stik z bakterijami, in sčasoma upadajo.
Njihovo mesto zavzamejo obstojnejša protitelesa IgG, ki lahko ostanejo v telesu več deset let.
Na ta način se prisotnost bakterij v telesu posredno testira z odkrivanjem protiteles, posebej usmerjenih proti spirohetam borelije.
Protitelesa na različnih stopnjah okužbe so lahko usmerjena proti različnim beljakovinam borelije. Na primer, v zgodnji fazi je to protein p41.
V poznejših fazah se začne pojavljati vedno več beljakovin, na primer p21, p30, p39, p43. Zato je diagnoza lymske borelioze izjemno težka.
Izbor bakterijskih beljakovin je izjemno pomemben, da ima test visoko diagnostično vrednost. Zato je treba pri diagnozi lymske borelioze rutinsko uporabljati teste ELISA II ali III generacije, pri katerih se izberejo sklopi beljakovin, da se doseže najbolj zanesljiv rezultat.
Test ELISA in borelioza. Kdaj narediti?
Lymska borelioza je bakterijska bolezen, ki jo povzročajo bakterije Borrelia burgdorferi in njene številne sorte.
Diagnoza bolezni zaradi zapletenosti imunskega odziva proti boreliji in pomanjkljivosti laboratorijskih metod ni enostavna.
Najpogosteje uporabljena laboratorijska metoda je zelo občutljiva metoda ELISA, ki zazna specifična protitelesa, vzgojena proti bakterijskim beljakovinam.
Pri diagnozi lymske borelioze se uporablja posredna metoda ELISA, v kateri se ločijo naslednje faze:
- inkubacija jamic na plošči z materialom, zbranim od bolnika, npr. serumom. Če so v preizkušenem materialu protitelesa proti boreliji, se pritrdijo na beljakovine na dnu reakcijske vdolbine
- nato odvečni serum speremo s posebno pralno tekočino (pufer) in t.i. protitelo, vezano na encim, ki se veže na predhodno vezana protitelesa v reakcijskih jamicah
- nato dodamo substrat za konjugat in pride do barvne reakcije (pozitiven rezultat) ali brez barvne reakcije (negativni rezultat)
- zadnji korak je odčitavanje (spektrofotometer) koncentracije protiteles proti boreliji v pacientovem serumu
Test ELISA za lajmsko bolezen se opravi iz krvi, v primeru nevroloških simptomov (nevroborelioza) pa tudi iz cerebrospinalne tekočine.
Sinovialne tekočine se ne sme testirati, saj obstaja velika verjetnost lažno pozitivnih rezultatov.
Osnova za diagnozo bolezni so klinični simptomi, ki kažejo na to, kar potrjujejo rezultati laboratorijskih preiskav.
Dodatek rezultata laboratorijskega testa brez simptomov ne potrjuje diagnoze borelioze, saj se je izkazalo, da protitelesa proti boreliji odkrijemo tudi pri zdravih ljudeh.
Serološka diagnoza lymske borelioze se začne s polkvantitativnim presejalnim testom ELISA. Če je rezultat negativen, to pomeni, da spirohete borelije niso zaznane ali pa je rezultat lažno negativen.
Če je rezultat pozitiven ali šibko pozitiven (dvomljiv), je treba opraviti potrditveno Western blot testiranje, za katerega je značilna velika specifičnost.
To potrjuje, da so rezultati ELISA "resnični". Med diagnostiko ne morete preskočiti nobenega od zgornjih korakov in na primer takoj opraviti diagnozo z metodo Western blot ali pa diagnozo postaviti samo na podlagi pozitivnega rezultata ELISA.
Na Poljskem se diagnoza lymske borelioze zelo pogosto konča v prvi presejalni fazi, kar povzroči napačno razlago pozitivnih ali šibko pozitivnih rezultatov.
Priporočen članek:
Test preoblikovanja limfocitov (LTT) Dobro vedetiELISA test - cena. Koliko stane test ELISA?
Test stane približno 60 PLN in se opravi takoj. Na rezultate napotitve pa lahko počakate približno tri mesece.
Test ELISA - rezultati. Ali so lahko lažno pozitivni?
Lažno pozitivni rezultati so posledica navzkrižne reaktivnosti protiteles IgM z drugimi beljakovinami. Protitelesa, ki jih proizvaja telo, lahko "nepravilno" prepoznajo antigen drugih mikroorganizmov kot antigen borelije.
Najpogostejše "napake" se pojavijo pri ljudeh, okuženih s treponema pallidum, herpesvirusi in pri ljudeh s sistemskim eritematoznim lupusom in drugimi revmatskimi boleznimi.
Test ELISA - rezultati. Ali so lahko lažno negativni?
Lažno negativni rezultati se lahko pojavijo v zgodnji fazi okužbe, nato pa je treba test ponoviti po približno 3-4 tednih. To se imenuje serološko okno, to je začetno obdobje okužbe, v katerem telo še ni "uspelo" proizvajati specifičnih protiteles.
Prav tako pri ljudeh z imunsko pomanjkljivostjo, ki ne proizvajajo dovolj protiteles.
Velik problem, zlasti pri zelo intenzivnih okužbah, je pojav t.i. imunski kompleksi, ki jih sestavljajo antigeni borelijske spirohete in zanje značilna protitelesa.
Posledično protitelesa postanejo "nevidna" za pogosto uporabljene metode, kot je ELISA, in čeprav so prisotna v preizkušenem materialu, jih ni mogoče zaznati.
V takih primerih lahko laboratorij uporablja razgradnjo imunskih kompleksov. To zdravljenje je namenjeno sproščanju protiteles. Vendar se ta metoda ne uporablja pogosto zaradi pomanjkanja standardizacije v laboratorijih.
Vredno vedetiZakaj diagnoza borelioze ni enostavna?
To je zaradi zapletenosti imunskega odziva proti boreliji in omejitev laboratorijskih metod. Raznolikost sort in pojav novih, ki povzročajo okužbe, zlasti na evropski celini, ne olajšata razvoja učinkovitih diagnostičnih metod.
V Evropi se je pred kratkim pojavilo več sort, kot so Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana in Borrelia spielmanii. Poleg tega se v telesu spirohete borelije lahko spremenijo v ciste ali ostanejo na mestih telesa, ki niso dostopne celicam imunskega sistema.
Biti tako "neviden" za imunski sistem. Poleg tega je bilo dokazano, da lahko tkiva vsebujejo drobce bakterij, ki imajo močno protivnetne lastnosti. Verjamejo, da so kljub negativnim rezultatom laboratorijskih testov odgovorni za kronične simptome borelioze.
Literatura
1. Witecka-Knysz E. et al. Lymska bolezen: zakaj je diagnoza tako težka? Laboratorijski diagnostik april 2007.
2. Moore A. et al. Trenutne smernice, pogoste klinične pasti in prihodnja navodila za laboratorijsko diagnozo lymske bolezni, ZDA. Emerg Infect Dis. 2016, julij; 22 (7).
3. Laboratorijska diagnostika bolezni, ki se prenašajo s klopi. Priporočila delovne skupine: Nacionalna zbornica laboratorijskih diagnostikov, Nacionalni inštitut za javno zdravje-Nacionalni inštitut za higieno, nacionalni svetovalec na področju nalezljivih bolezni, Oddelek za nalezljive bolezni in nevroinfekcije, Medicinska univerza v Białystoku, Poljsko društvo za virusologijo, Varšava 2014
4. Hosseini S. et al.: Encimsko vezani imunosorbentni test (ELISA) od A do Z. Springer 2017.
