Antinuklearna protitelesa (ANA)

Antinuklearna protitelesa so del zapletenega diagnostičnega procesa sistemskih bolezni vezivnega tkiva. Kompleksni mehanizem tvorbe antinuklearnih protiteles otežuje razlago njihovih rezultatov in prisotnost ali odsotnost določenega protitelesa ne kaže vedno na bolezen. Katere so vrste antinuklearnih protiteles? Kdaj je treba opraviti test?

Kazalo:

1. Antinuklearna protitelesa - vrste
2. Antinuklearna protitelesa - tvorba in mehanizem delovanja
3. Antinuklearna protitelesa - indikacije za študijo
4. Antinuklearna protitelesa - kakšen je test?
5. Antinuklearna protitelesa - kako razlagati rezultat?

Protijedrska protitelesa (ANA) so avtoprotitelesa, usmerjena proti elementom celičnega jedra, npr.DNK in citoplazmi. So eno najbolj raznolikih in najbolj preučevanih protiteles.

Antinuklearna protitelesa - vrste

• protitelesa proti izvlečnim jedrskim antigenom (anti-ENA):
• proti DNA topoizomerazi I (anti-Scl70)
• proti ribonukleoproteinu (anti-RNP)
• proti Smithu antigenu (anti-Sm)
• anti-Mi2 / Mi-2
• anti-Ro (SS-A)
• anti-La
• anti-Jo1
• anti-PM-Scl
• proti-kn
• protitelesa proti jedrskemu proteinu, ki tvori pore, gp-2010 (anti-gp-210)
• protitelesa proti nativni dvoverižni DNA (anti-dsDNA)
• anti-centromerna protitelesa (anti-ACA)

Antinuklearna protitelesa - tvorba in mehanizem delovanja

Avtoimunost je nenormalen odziv imunskega sistema na lastna tkiva, kar povzroči nastanek avtoimunskih bolezni.

Opisani so bili različni mehanizmi avtoimunosti, eden izmed njih je sproščanje antigenov, skritih pred imunskim sistemom, na primer kot posledica vnetnih poškodb tkiva.

Nato se sprostijo elementi, ki jih najdemo v celičnem jedru, na primer DNA, RNA, histoni, ki jih imunski sistem začne prepoznavati kot nekaj tujega in proti njim proizvaja protitelesa proti jedru.

Antinuklearna protitelesa - indikacije za študijo

• sum bolezni vezivnega tkiva:
• sistemski eritematozni lupus (prisotnost protiteles pri 95-100% bolnikov; protitelesa proti dsDNA so poseben označevalec bolezni)
• lupus, ki ga povzroča droga (95-100% bolnikov)
• antifosfolipidni sindrom (40-50% bolnikov)
• sistemska sklerodermija (80-95% bolnikov, zlasti protitelesa proti Scl70)
• polimiozitis in dermatomiozitis (40-80% bolnikov, zlasti protitelesa proti Jo1 in anti-Mi2)
• Sjögrenov sindrom (48–96% bolnikov, zlasti protitelesa proti Ro in Pro)
• revmatoidni artritis (približno 10% bolnikov)
• mladostni idiopatski artritis (manj kot 10% bolnikov)
• Raynaudov sindrom (20-60% bolnikov)
• fibromialgija (15-25% bolnikov)
• mešane bolezni vezivnega tkiva (95-100% bolnikov)
• ocena aktivnosti bolezni in spremljanje učinkovitosti zdravljenja, npr.protitelesa proti dsDNA v sistemskem eritematoznem lupusu
• povezovanje prisotnosti protiteles s pojavom specifičnih simptomov bolezni, npr.Sjögrenov sindrom in prisotnost protiteles proti Ro in La
• napovedovanje bolezni v prihodnosti

Antinuklearna protitelesa - kakšen je test?

Za določanje antinuklearnih protiteles se kri, odvzeta iz komolčnega upogiba, posti.

Metode za določanje protiteles so zelo različne in so odvisne od vrste protiteles, ki se merijo. Gre predvsem za imunološke metode, kot so:

• ELISA
• RIA
• posredna imunofluorescenca
• metoda dvojne imunodifuzije
• Western blot

V primeru antinuklearnih protiteles se uporablja dvostopenjska diagnoza. Najprej se izvede presejalni test z uporabo posredne imunofluorescenčne metode, za katero je značilna visoka občutljivost.

Metoda posredne imunofluorescence vključuje imobilizacijo HEp-2 celic, pridobljenih iz človeških epitelijskih celic, na mikroskopskem stekelcu.

Celice te linije imajo v citoplazmi in celičnem jedru antigene, ki vežejo patološka protitelesa iz pacientove krvi.

Po dodajanju pacientovega seruma v kozarec se antinuklearna protitelesa vežejo na specifične antigene in so zaradi posebnih fluorescentnih markerjev vidna pod mikroskopom.

Prednost posredne imunofluorescencije je možnost razlikovanja vrst protiteles glede na vrsto osvetlitve fluorescentnega barvila.

Na primer, žarenje jedra homogenega tipa kaže na prisotnost protiteles proti dsDNA ali anti-ssDNA.

Pozitiven rezultat presejalnega testa je treba vedno potrditi. V ta namen se uporabljajo zelo specifične imunološke metode, npr. Western blot. Po zaznavi prisotnosti in identifikaciji vrste antinuklearnega protitelesa se določi njegov titer, to je največja razredčitev seruma, pri kateri je mogoče zaznati prisotnost protiteles.

Antinuklearna protitelesa - kako razlagati rezultat?

Pravi titer antinuklearnih protiteles mora biti pod 1:40.

Če je presejalni test za antinuklearna protitelesa negativen in ni kliničnih simptomov, ki bi nakazovali sistemsko bolezen vezivnega tkiva, se diagnoze ne sme razširiti na posebna protitelesa, npr. Anti-dsDNA, anti-Sm.

Klinično pomembni titri pri odraslih so ≥ 1: 160 in pri otrocih ≥ 1:40.

V primeru pozitivnih rezultatov je predlagano razlagati rezultat testa na naslednji način:

• titer 1: 40-1: 80 - mejni rezultat (šibko pozitiven), v odsotnosti kliničnih simptomov bolezni vezivnega tkiva ni priporočljivo ponoviti testa ali opraviti nadaljnjega testa, ker se rezultati pri večini ljudi z leti ne spreminjajo
• titer 1: 160-1: 640 - srednje pozitiven rezultat, v odsotnosti kliničnih simptomov bolezni vezivnega tkiva je priporočljivo ponoviti test po 6 mesecih
• titer ≥ 1: 1280 - visok pozitiven rezultat, ob prisotnosti kliničnih simptomov bolezni vezivnega tkiva je za diagnozo bolezni potrebna nadaljnja specialistična diagnoza

Upoštevati je treba, da je serološko testiranje antinuklearnih protiteles del zapletenega diagnostičnega postopka, pozitiven rezultat pa je treba vedno razlagati v okviru klinične slike in prisotnosti značilnih simptomov bolezni.

Nizkotitrna antinuklearna protitelesa najdemo pri 5% zdrave populacije in njihova pogostnost narašča s starostjo.

Poleg tega je njihova prisotnost v fizioloških in patofizioloških pogojih, v katerih protitelesa proti jedru nimajo diagnostičnega pomena:

• okužbe, npr.tuberkuloza, sifilis, malarija
• jetrna bolezen, npr.ciroza jeter
• pljučne bolezni, npr.sarkoidoza, azbestoza
• rak, npr. levkemija, limfom, rak dojke, melanom
• kožne bolezni, na primer luskavica, lišaj planus
• po presaditvi organov, npr. presaditvi srca, presaditvi ledvic
• uporaba zdravil, npr. antiepileptikov, hidralazina, litijevih soli,
• druge avtoimunske bolezni, npr.Hashimotova bolezen, Addisonova bolezen, diabetes tipa I
• nosečnost (do 20% nosečnic)

Vredno vedeti ...

Etnične razlike so značilne za pojav različnih vrst antinuklearnih protiteles.

Na primer, belci s sistemsko sklerozo imajo večjo verjetnost, da imajo protitelesa proti ACA, afriški Američani in Afričani pa protitelesa, ki reagirajo na topoizomerazo.

Priporočen članek:

Diagnostični test ANA (antinuklearnih protiteles)

Literatura

1. Fischer K. et al.Autoprotitelesa v revmatološki praksi. Forum Reumatol. 2016, 2, 1, 39–50.
2. Notranje bolezni, uredil Szczeklik A., Medycyna Praktyczna Kraków 2010
3. Laboratorijska diagnostika z elementi klinične biokemije. Priročnik za študente medicine uredili Dembińska-Kieć A. in Naskalski J.W., Elsevier Urban & Partner Wydawnictwo Wrocław 2009, 3. izdaja

O avtorju

Karolina Karabin, dr. Med., Molekularni biolog, laboratorijski diagnostik, Cambridge Diagnostics Polska Biolog s specializacijo iz mikrobiologije in laboratorijski diagnostik z več kot 10-letnimi izkušnjami v laboratorijskem delu. Diplomant šole za molekularno medicino in član poljskega Društva za človeško genetiko, vodja raziskovalnih štipendij v Laboratoriju za molekularno diagnostiko na oddelku za hematologijo, onkologijo in notranje bolezni Medicinske univerze v Varšavi. Na 1. medicinski fakulteti Medicinske univerze v Varšavi je zagovarjala naziv doktorice medicinskih znanosti s področja medicinske biologije. Avtor številnih znanstvenih in poljudnoznanstvenih del s področja laboratorijske diagnostike, molekularne biologije in prehrane. Vsak dan kot strokovnjak na področju laboratorijske diagnostike vodi vsebinski oddelek pri Cambridge Diagnostics Polska in sodeluje z ekipo nutricionistov na dietetični kliniki CD. Svoje praktično znanje o diagnostiki in dietni terapiji bolezni deli s strokovnjaki na konferencah, izobraževanjih ter v revijah in spletnih straneh. Zanima jo predvsem vpliv sodobnega življenjskega sloga na molekularne procese v telesu.

Preberite več člankov tega avtorja